2018年5月9日星期三

基因相关概念辨析

基因相关概念辨析


一条DNA双链上可以有很多个基因。
画一个基因的示意图时,一般将非模板链(又称编码链、有义链、正链)以5'端到3'端(从左至右)方向画于上方,将模板链(又称非编码链、无义链、负链)以3'端到5'端(从左至右)方向画于下方;
基因转录时以模板链为模板转录成mRNA,mRNA序列和非模板链相同,故有编码链、有义链、正链等概念;
有义链等是相对基因而言,DNA双链的一条链对某基因而言为有义链,对另一个基因就有可能是无义链。

简写字母与碱基对应关系表

简写字母与碱基对应关系表



在设计简并引物和测序过程中常会到非ATGC这四种字母,其对应关系如表所示。




















注:ATGC的两两组合共有6种。
含酮基的不仅只有G/T,还有C/U。含氨基的不仅只有A/C,还有G。


References:
1. https://zh.wikipedia.org/wiki/核碱基
2. https://zh.wikipedia.org/wiki/核苷酸



2018年5月7日星期一

DNA复制、RNA引物水解和端粒

DNA复制、RNA引物水解和端粒



起始位点(origin of replication, ori)的序列倾向于富含A-T碱基对,这有益于启动的实现,因为A-T碱基对只有两条氢键相连(C-G碱基对有三个)。该序列被归类为共同序列(consenseus sequence),因为此处核苷酸序列基本上都是相同,相关的解螺旋酶作用于这个位点,DNA的双链被分开,复制随即开始。

DNA复制开始前都需要一个自由的3'羟基(现已发现四种不同的复制机制),所有的真核生物、许多DNA病毒、噬菌体和质粒用引物酶合成一小段包含有一个自由3'羟基的RNA引物,DNA聚合酶随后会顺着3'羟基延长序列。

DNA聚合酶在合成前导链(Leading strand)时是连续合成的,合成后随链(Lagging strand)时则是不连续的(形成冈崎片段)。特别来说,前导链的活动区域只结合一个RNA引物;而后随链则结合多个RNA引物。

当DNA合成一定长度后,RNA水解酶(RNase)会水解那些曾用于使DNA聚合酶起始复制的RNA引物,DNA聚合酶ε会进去缺口并生成DNA填补缺口。当这一步完成时,前导链的一个缺口和后随链的数个缺口都会被填补上。DNA连接酶将冈崎片段连接起来,从而完成新DNA分子的合成。

最后DNA新合成的片段在旋转酶的帮助下重新形成螺旋状。


DNA聚合酶ε无法完成后随链第一个冈崎片段切除RNA引物后的空缺的填补,同样的前导链的RNA引物切除后也没有酶可以对这个空缺进行填补,所以DNA每复制一次都会缩短若干核苷酸的长度,这个机制目前被认为与细胞和生物衰老有关。

端粒(Telomere)是真核生物染色体末端的DNA重复序列,端粒酶存在的时候,可以填补这个缺口。端粒酶不是在所有细胞中都表达的,一般大多的正常细胞不表达端粒酶活性,端粒酶是一种自身携带RNA模板的反转录酶,可以利用这段RNA的模板反转录成DNA。


DNA合成的能量来自于:一个自由的核苷酸添加到正在延长的DNA链上时,它的两个磷酸基团脱落,释放的能量将会生成一个磷酸二酯键把剩下的磷酸基团和DNA链连接起来。有些DNA聚合酶具有校正的功能,会移除错配的碱基。这样的能量机制和纠错机制可以解释DNA复制的方向性(从5'端向3'端合成)。如果DNA是从3'端向5'端合成的话,那么能量就会通过5'端提供而不是自由的核苷酸了,如果5'端核苷酸在校正的过程中需要被移除,那么三磷酸末端就会丢失,因此,用于提供添加新核苷酸的能量来源也就丢失了。


References:

核糖体RNA

核糖体RNA 原核生物核糖体中包括 5S rRNA,16S rRNA,23S rRNA 这三种rRNA,大小分别在120nt、1500nt、2900nt左右【1,2,3】。 Small subunit  ribosomal RNA  也就是 16S rRNA【 5 】...